В последнее время большое внимание уделяется неинвазивным методам исследования, исключающим возможность инфицирования больного и стрессового воздействия при взятии крови. Удобным объектом неинвазивного метода является слюна. Медиков привлекают также простота взятия и анализа проб слюны, легкость ее хранения, возможность частого взятия проб и полная безопасность при этом для здоровья пациента.
Основное же внимание исследователей привлекают возможности диагностирования патологических состояний разных систем организма. Слюна идеально подходит для диагностики, так как содержит специфические растворимые биологические маркеры (биомаркеры), имеет осмотическое давление и гидратацию. Возрастает интерес к использованию слюны и других образцов из полости рта для диагностики системных заболеваний и болезней полости рта. Это особенно важно в ряде популяций и при обследовании детей и престарелых, при ограниченном доступе к медицинской помощи в удаленных географических районах, где забор крови невозможен. Для обоснования концепции о том, что саливарный диагностический тест предпочтительнее по сравнению с инвазивными альтернативами, достаточно напомнить об успешном использовании орального термометра, который полностью заменил своего предшественника, ректальный термометр.
Имевшие до недавнего времени затруднения использования слюны в диагностических целях из-за недостаточно изученного гематосаливарного барьера, низкого уровня определения, сложности обнаружения, а также из-за того, что не всегда получаемые показатели коррелируют с таковыми в плазме крови были в значительной степени устранены в результате тщательного изучения физиологии слюнных желез, разработки чувствительных методов амплификации, методологии забора и обработки образцов слюны. Последние достижения в диагностике по слюне были обусловлены новыми молекулярными подходами (протеомики, геномики и транскриптомики) и метагеномными анализами.
Анализ слюны для экспертизы ДНК. Наиболее широко используемый вид образца из полости рта - это мазок, при исследовании которого можно получить дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) образца. Это используется многие годы в судебно-медицинских исследованиях, а в последнее время – для анализа одиночных нуклеотидных полиморфизмов мутаций, связанных со специфическими заболеваниями. За счет выделения ДНК из слюны возможно типирование АВО (системы генов, определяющих группу крови). K. Aki и соавт. (2012) показали, что достаточно простой и широко используемый в судебно-медицинской области метод проточной цитометрии может быть полезен для сравнения различий между экспрессией антигенов A и/или B и H красных кровяных клеток с различным фенотипом и методом PASA для определения генотипа cisA(2)B(3) родословной. Образец ДНК может быть взят из различных областей в/на теле человека, а проба слюны удобна для использования: ротовой ершик помещают в стабилизированную для транспортировки среду и отправляют в лабораторию для анализа. Генотипирование лиц с нарушением последовательности ДНК имеет коммерческий успех, однако его медицинское значение спорно и не отвечает научной точности.
Определение гормонов в слюне. Анализ образцов из полости рта для определения кортизола, эстриола, эстрогена, тестостерона не только является коммерчески более доступным, но и обеспечивает точное обнаружение этих гормонов. Уровень стероидных гормонов (например, сульфатированные стероиды DHEA-S) достоверно определяется в слюне, а титрование отражает его уровень в плазме крови, однако эти показатели не очень точно коррелируют между собой. Данный факт свидетельствует о необходимости качественного сравнения количественного анализа биомаркеров, а для получения количественного результата, например при анализе уровня глюкозы или DHEA-S, необходимо определять соотношение слюна/плазма.
Биомаркеры слюны для диагностики инфекционных заболеваний. Многие молекулы, полученные из слюны или десневой жидкости, используются в качестве диагностических биомаркеров заболеваний полости рта, включая состояния, вызванные грибами (Candida), вирусами папилломы человека (ВПЧ), вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ), цитомегаловирусом (ЦМВ) и бактериями (несколько видов, участвующих в заболеваниях пародонта и кариесе). Орофарингеальный кандидоз является одним из наиболее распространенных заболеваний полости рта, чаще всего вызван Candida Albicans, изначально был описан как псевдомембранозный, гиперпластический и эритематозный, а хроническое наличие наблюдается также на коже и слизистых оболочках. Недавнее исследование показало, что микрофлора слюны состоит из Candida - 75%, Cladosporium - 65%, Aureobasidium и Saccharomycetales - 50%, Aspergillus - 35%, Fusarium - 30% и Cryptococcus - 20%. Диагноз орального кандидоза основывается на наличии культуры возбудителя в пробирке или идентификации путем визуализации под микроскопом. На сегодняшний день слюна применяется в основном для выделения возбудителя, о наборах для обнаружения антигена Candida уже сообщалось. Экспериментальные попытки были также сделаны для обна- ружения слюнных IgA- или IgG-антител к Candida, но иммунодиагностика остается недостижимой из-за различия в чувствительности и специфичности различных анализов при обнаружении различных антигенов Candida.
Распространенными являются заболевания полости рта, вызванные ВПЧ, вирусами простого герпеса типа 1 и 2, ЦМВ, вирусом ветряной оспы (афтозный тип), вирусом герпеса человека 8 типа (ВПГ-8). Эти вирусы более часто встречаются у пациентов с иммунодефицитом, особенно с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)/синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД), не получающих высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ). Во многих случаях возбудитель вызванного заболевания полости рта был представлен оппортунистической или вторичной инфекцией и считался ранним проявлением СПИДа у пациентов, инфицированных ВИЧ. Частота многих связанных со СПИДом оральных проявлений меняется, но увеличивается в отсутствие ВААРТ, и может свидетельствовать о неадекватном лечении ВААРТ, развитие лекарственной устойчивости или о терапевтической неудаче. Ученые подтвердили, что саливарный тест для выявления антител к ВИЧ так же чувствителен и специфичен, как и анализ крови, что привело к значительному увеличению тестирования на ВИЧ в различных местах, в том числе в отделениях неотложной помощи, в клиниках при заболеваниях, передающихся половым путем, в центрах здоровья населения, в банях, а в последнее время и на установках и инструментах в стоматологических наборах. Возможность точного определения антител к ВИЧ говорит о возможности выявления антител и ко многим другим патогенам. По последним данным литературы, это большое число вирусных и бактериальных патогенов. Стандартный подход к клинической лабораторной диагностике ВИЧ - это тестирование сыворотки или плазмы крови на иммуноферментном анализаторе и при положительном результате - вестерн-блот. Слюна успешно используется в лабораторной диагностике для выявления ВИЧ-антигена и антител в различных нуклеиновых и иммунологических форматах и микрофлюидных диагностических приборах. Используя экспериментальные методики, обнаружили дефензины в слюне, что может быть автоматизировано. Экспериментально обнаружен ВПЧ в образцах слюны с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), и эта методика была также использована для обнаружения различных типов ВПЧ, результаты были обнадеживающие, что говорит о необходимой оптимизации тестирования. Отклонения ДНК при ВЭБ, обнаруженные методом ПЦР, показали в крови и слюне аналогичные результаты у ВИЧ-инфицированных пациентов. Нестимулированная слюна также является надежным методом обнаружения ЦМВ с помощью ПЦР в поддесневых бляшках у больных с хроническим периодонтитом. Образцы слюны были успешно использованы для прямого генотипирования штаммов ЦМВ новым методом ПЦР-полиморфизма длины рестрикционных фрагментов в сочетании с капиллярным электрофорезом фрагментов для генотипирования.