Гемоглобин (Hb)

Гемоглобин – красный пигмент крови (эритроцитов) человека и животных. Подсчитано, что в одном эритроците содержится около ~ 340000000 молекул гемоглобина. В крови человека в среднем содержится ~ 14,5% гемоглобина, его общее количество ~ 750 г. В эритроцитах гемоглобин находится в растворенном состоянии, несмотря на то, что его содержание в них более 30%.

Гемоглобин представляет собой сложный белок, относящийся к группе гемопротеинов; белковый компонент в котором представлен глобином, небелковый – простетической группой. Простетическая группа в молекуле гемоглобина представлена 4 одинаковыми железопорфириновыми соединениями, которые называются гемами. Молекула гема состоит из порфирина IХ, связанного с железом двумя атомами азота ковалентными и двумя другими атомами азота координационными связями. Атом железа (II) расположен в центре гема и придает крови характерный (красный) цвет, степень его окисления не изменяется независимо от присоединения или отдачи кислорода.


Видовые различия гемоглобина обусловлены химическим составом и строением глобина. Гемоглобины представляют собой тетрамерные белки, молекулы которых образованы различными типами полипептидных цепей, обозначаемых как , , , . В состав молекулы входят по 2 полипептидные цепи двух разных типов, каждая из которых оборачивает 1 гем гемоглобина. Гемоглобины различных видов различаются вторичной, третичной и четвертичной структурами, и индивидуальные свойства гемоглобинов неразрывно связаны с их структурами. Известно, что гемоглобин человека состоит из двух равных половин, каждая из которых образована двумя одинаковыми полипептидными цепями. У человека обнаружены гемоглобины различных типов, которые отличаются по химическому строению. В крови взрослого человека содержится гемоглобин А (HbA), состоящий из двух - и двух -полипептидных цепей (22). В дополнение к основному HbA в крови взрослого человека обнаружен гемоглобин A2 (HbA2), состоящий из двух - и двух -полипептидных цепей (22), на долю которого приходится ~ 2,5% от всего гемоглобина. Кроме того, известен фетальный гемоглобин F (HbF) – гемоглобин новорожденных, состоящий из двух - и двух -полипептидных цепей (22), и отличающийся от HbA вторичной, третичной и четвертичной структурами, что обусловливает их различия: по спектральным характеристикам, электрофоретической подвижности, устойчивости к тепловой денатурации и др. Кровь новорожденного ребенка состоит на ~ 80% из HbF, который к концу первого года жизни почти целиком заменяется на HbA (в крови взрослого человека содержится до ~ 1,5% HbF от общего количества гемоглобина).

Физиологическая роль гемоглобина заключается в транспорте кислорода (О2) к органам и тканям, транспорте углекислого газа (СО2) от тканей к легким (образовавшиеся при этом соединения называются оксигемоглобином - HbО2, и карбоксигемоглобином - HbCO2, соответственно); кроме этого он является внутриклеточным буфером, который поддерживает оптимальную для метаболизма pH. Следует заметить, что реакция присоединения молекулярного кислорода не является истинным окислением гемоглобина, так как валентность железа в гене при этом не изменяется, и эту реакцию правильнее называть оксигенацией. Истинное окисление гемоглобина происходит только тогда, когда железо переходит в трехвалентное состояние. В крови гемоглобин существует по крайней мере в четырех формах: оксигемоглобин, дезоксигемоглобин, карбоксигемоглобин, метгемоглобин. В эритроцитах молекулярные формы гемоглобина способны к взаимопревращению, их соотношение определено индивидуальными особенностями организма.

Нормальная концентрация гемоглобина у взрослого колеблется от 130 до 185 г/л (80 - 115 %). За среднюю величину принимают 160 г/л (100 %). При рождении ребенка пуповинная кровь содержит 140 - 190 г/л гемоглобина. Но в течение первых часов антенатальной жизни общая концентрация гемоглобина повышается до 165 - 225 г/л. Через несколько дней после рождения содержание гемоглобина уменьшается и далее в первые месяцы жизни наблюдается трименонредукция (трименонанемия) – нормальное временное постепенное снижение уровня гемоглобина, концентрация которого к третьему месяцу доходит до 63 – 82 % (100 - 130 г/л). Затем содержание гемоглобина медленно повышается и к концу первого года жизни достигает средних величин – около 76 % - 120 г/л (у детей в раннем возрасте нет различия между мужским и женским полом). После первого года жизни повышение продолжается и достигает нормальных (для взрослого) величин в пубертате. Так как у ребенка в первые месяцы жизни наблюдается физиологическая анемия (трименонредукция), следует учитывать, что уменьшение концентрации Hb в этом возрасте до 60 - 65 % не следует считать патологическим состоянием, нуждающимся в лечении.

Нормальные величины гемоглобина у взрослого человека со среднестатистической массой тела: у мужчин - 130 - 160 г/л, у женщин - 120 - 140 г/л. Содержание гемоглобина снижается на ~ 10% в промежутке времени от 17 до 07 час утра, а также после еды. Снижение гемоглобина от нормальных величин на ~ 6% наблюдается при взятии пробы в положении лежа. Незначительное, но диагностически значимое, снижение нижнего порога нормальных величин гемоглобина встречается у мужчин возрастной группы 65 - 74 года.

Клиническое значение:
 снижение концентрации гемоглобина: анемии;
 повышение концентрации гемоглобина: полицитемия, гемоконцентрация при дегитратации, ожогах, кишечной непроходимости, упорной рвоте; пребывание на больших высотах, чрезмерная физическая нагрузка или возбуждение; сердечно-сосудистая патология, обычно врожденная, приводящая к значительному венозному сбросу; заболевания легких, приводящие к снижению легочной перфузии, плохой аэрации легких, легочной артериальной фистуле; хроническое химическое воздействие нитритов, сульфонамидов, вызывающих образование мет- и сульфогемоглобина.

В лаборатории для определения концентрации гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина, образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гему различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора. «Старыми» методами, все еще применяемыми в ряде лабораторий являются: сапониновый и методе Сали. При использовании сапонинового метода тельца Гейнца (маленькие округлые включения в эритроцитах, образованные из денатурированного гемоглобина) не растворяются, раствор остается мутноватым, за счет чего может меняться спектр поглощения раствора, и ошибка при этом достигает 20 - 30%. В методе Сали измеряется гематин, образовавшийся при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой. Метод основан на визуальной оценке содержания гемоглобина путем сравнения окраски исследуемой пробы со стандартными растворами солянокислого гематина. Ошибка метода достигает ~ 30%, на результаты определения влияют многие факторы: время реакции между гемоглобином и соляной кислотой, которое может колебаться от 2 до 40 мин в зависимости от содержания белков крови; оттенок цвета геминхлорида, зависящий от содержания билирубина в крови; харак-тера освещения и пр.

Химические и спектрофотометрические методы имеют высокую точность и рекомендуются в качестве референсных, но из-за трудоемкости и значительной стоимости анализа для рутинных определений не применяются. Для рутинных лабораторных исследований наиболее предпочтительны колориметрические методы, как наиболее дешевые, простые и быстрые в исполнении. Кровь человека – это нормальная смесь производных гемоглобина с различными спектрами поглощения. При количественном определении гемоглобина колориметрическими методами возникает проблема в выборе реагента, который превращал бы все производные гемоглобина только в одну форму перед фотометрическим анализом. Лучшими методами, количественно превращающими гемоглобин в его производные, оказались гемиглобинцианидный (HbCN), гемихромный (HbChr) и гемиглобиназидный (HbN3), которые при фотометрировании дают наименьшую ошибку определения среди других методов анализа.