Технология xMAP - это проточное мультиплексирование на микрочастицах, которое позволяет исследовать до 100 параметров одновременно (мультиплексность), при этом минимальный объем биологического материала составляет всего от 12,5 мкл до 20 мкл (цельная кровь, сыворотка или плазма крови). В настоящее время уже решен ряд задач клинической лабораторной диагностики с помощью xMAP, в том числе:
изотипирование иммуноглобулинов (Ig), составление цитокинового и метаболического профилей, комплексная оценка уровня маркеров острой фазы, ангиогенеза, апоптоза, вирусных инфекций, онкомаркеров;
перспективными направлениями для приложения технологии xMAP являются аллергология, HLA- и SNP-генотипирование, исследование инфекционных и аутоиммунных заболеваний (при этом реагенты для данных областей применения доступны уже сегодня).
Проточное мультиплексирование на микрочастицах основано на следующих технологиях:
СОБСТВЕННО ТЕХНОЛОГИЯ xMAP (xMAP technology), которая разработана корпорацией Luminex - это полистироловые микрочастицы (микросферы из полистирола - 5,6 мкм), меченные двумя флюоресцентными красителями - смесь стрептавидин/фикоэритрин, называемые также флуоресцентными репортерами или флуорофорами или реагентами, с разной длиной волны и взаимодействующими со специфическими аналитами («аналит» - вещество, определяемое при анализе); различные пропорции красителей позволяют составить до 100 спектральных адресов микрочастиц; каждому «оттенку» микрочастицы (микросферы) соответствует один аналит, который комплиментарно (ковалентно) взаимодействует с его «партнером» по межмолекулярному взаимодействию, «пришитому» на поверхность микросфер (например, антитело или олигонуклеотид); концентрация аналита рассчитывается на основании интенсивности флюоресценции микросфер, измеренной после взаимодействия детектирующих биотинилированных биомолекул со стрептавидином, несущим флюорофорную метку;
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ с использованием: двух лазеров для возбуждения свечения флюорофоров; проочной кюветы (ширина которой сопоставима с диаметром микросферы); оптической схемы; лавинных фотодиодов с температурной компенсацией; чувствительного фотоумножителя для регистрации флюоресценции внутри и на поверхности микрочастиц;
один лазер, с длиной волны 635 нм (красный), используется для возбуждения флюоресценции смеси красителей, определяющих тип микросферы, другой лазер, с длиной волны 532 нм (зеленый), возбуждает свечение фикоэритрина. Именно проточная цитометрия позволила определять интенсивность флюоресценции для каждой микросферы в отдельности; учитывая, что число микросфер в одной лунке (на каждый аналит) измеряется сотнями и тысячами, качество измерения флюоресцентного сигнала и концентрации аналита является чрезвычайно высоким; увствительность детекции также очень высокая – 1000 молекул фикоэритрина на 1 микросферу (с автоматическим вычетом флюоресценции раствора).
ВЫСОКОСКОРОСТНОЙ ЦИФРОВОЙ СИГНАЛЬНЫЙ ПРОЦЕССОР для эффективной обработки флюоресцентного сигнала от тысяч микросфер (только современные процессоры в состоянии обработать такой колоссальный поток информации).
Преимущества технологии xMAP:
мультиплексность - одновременное определение до нескольких сотен аналитов в одном образце; универсальность - качественный и количественный анализ нуклеиновых кислот, белков, а также изучение взаимодействий рецептор-лиганд, фермент-субстрат, антиген-антитело и др.; высокая производительность - до 85 000 тестов в час; гибкость - возможность самостоятельного формирования панелей для конкретных задач; ввоспроизводимость результатов - применение суспензии из 2500 микросфер обеспечивает надежность данных; информативность - анализ результатов в режиме реального времени; экономичность - минимальный объем образца, снижение трудовых ресурсов и времени анализа, экономичное расходование реагентов; упрощенный анализ результатов - благодаря применению программного обеспечения, например, xPONENT 3.1.; повышение эффективности работы лаборатории благодаря экономии времени, трудовых затрат, реагентов и расходных материалов.
Технология xMAP - это проточное мультиплексирование на микрочастицах, которое позволяет исследовать до 100 параметров одновременно (мультиплексность), при этом минимальный объем биологического материала составляет всего от 12,5 мкл до 20 мкл (цельная кровь, сыворотка или плазма крови). В настоящее время уже решен ряд задач клинической лабораторной диагностики с помощью xMAP, в том числе:
