Возбудители кокковых пневмоний и их лабораторная диагностика
Различные микроорганизмы, которые проникают в человечески организм через дыхательные пути, могут оказаться возбудителем пневмонии. К ним, как правило, относятся кокковые (стрептококки, пневмококки, стафилококки и так далее) и бациллярные (палочки Пфейффера, диплобациллы Флидлендера). Стоит отметить, что пневмококк считается одним из наиболее частых причин образования пневмонии, в частности крупозной. В последнее время все чаще стали также наблюдаться стафилококковые пневмонии.
Для исследования используются такой материал как слизь, которую берут из носоглотки при помощи тампона, мокрота, различные выпоты, кровь, пунктаты и гной. В большинстве случаев исследованиям подвергается носоглоточная слизь и мокрота.
Для микроскопического исследования необходимо сделать совершить мазки на двух предметных стеклах. Один из них окрашивается по Граму, в то время как второй – краской Пфейффера или другими словами разведенным карболовым фуксином. Если в мазках обнаруживается ланцетовидные диплококки, которые окружаются светлой зоной капсулы, то, как правило, устанавливается пневмококковая этиология. При обнаружении грамположительных кокков, которые располагаются цепочкой, можно подавить предварительный диагноз стрептококковой инфекции.
Наличие стрептококков также позволяет определить характерная морфология расположения групп в виде гроздей винограда, а также положительная окраска по Граму. На палочку Пфейффера в большинстве случаев указывают мелкие грамотрицательные палочки, которые располагаются цепочкой и образуют гнездные скопления. Грамотрицательные диплобациллы разнообразной величины, которые окружены капсулой напоминающей светлый ореол, свидетельствуют о наличии диплобациллы Фридлендера. Однако микроскопический диагноз считается всего лишь предварительным и ориентировочным.
Чтобы получить точное представление о микробном пейзаже необходимо:
* выделить чистые культуры из изолированных колоний;
* изучить посевы на кровяном агаре;
* идентифицировать их.
При пневмококковой пневмонии для бактериологического исследования необходимо засеять материал на чашки Петри, которые содержат агар с добавлением примерно 7% дефибринированой кроличьей крови. Примерно через двое суток можно приступать к исследованию посевов на кровяном агаре, если температура термостата составляла 37 градусов.
Помимо этого, вместе с изучением внешнего вида колоний проводят их отсев в жидкие среды. Таким образом, колонии пневмококков на кровяном агаре приобретают вид мельчайших полупрозрачных образований
зеленовато-серого цвета. Это особенно ярко проявляется в тонком слое агара, при этом в центре имеется небольшой бугорок, а также более светлая периферия. Достаточно часто колонии окружены отсвечивающимся ореолом. Кроме того, в жидких средах пневмококки способны вызывать равномерное помутнение без образования осадка или пленок.
Помимо этого, микроскопирование позволяет обнаружить грамположительные кокки, которые имеют слегка удлиненную форму и напоминают ланцет. В основном их размеры колеблются пределах от 0,5 х 0,75 до 1 х 1,5 мкм. Как правило, располагаются они одиночно, однако иногда образовывают короткие цепочки по четыре пары кокков. Таким образом, пневмококки могут образовывать капсулу, которая окружается светлым ободком. Стоит отметить, что обычными методами такая капсула не окрашивается. Кроме того, пневмококки в присутствии желчнокислых солей и бычьей желчи легко лизируются. Что же касается обнаруженных во время исследований культур, то они обязательно подвергаются дополнительным анализам, чтобы определить тип пневмококка, устойчивость к антибиотикам, вирулентность для белых мышей, а также осуществляется серологические исследования. Вместе с посевом на агар внутрибрюшинно вводят исследуемый материал двум белым мышам, которые весят до 20 грам. Таким образом, ставится биологическая проба.
Бактериологическое исследование, как правило, обязательно проводится с употреблением кровяного и молочно-солевого агара. Чтобы обнаружить стафилококк используют материал, такой как выпоты, пунктат, экссудат и гной. Берут его непосредственно из очага заболевания, в основном это легочные и плевральные полости. Помимо этого, проводят дополнительные исследования носа и зева, однако они имеют второстепенное значение и нужны только для дополнения общей картины. Две или три капли материала помещается на поверхность чаши, которая содержит молочно-солевой агар, после чего посевы помещаются в термостат. Их сохраняют до тех пор, пока не образуется помутнение. В том случае, если в течение пяти дней не обнаруживается какого-либо роста микробов, посевы считаются отрицательными и уничтожаются. Если же все-таки наблюдается хоть малейший рост, то посевы извлекаются для детального анализа.
На твердых средах колонии стафилококков представляют собой правильные диски с блестящей поверхностью, при этом их размер в диаметре может достигать 4 миллиметров. Однако колонии достаточно легко снимаются с агара, непрозрачные, легко тянутся и окрашены в золотисто-оранжевый цвет. Что же касается стафилококков на кровяном агаре, то они, как правило, окружены зоной выраженного гемолиза. Некоторые штаммы стафилококков в жидких средах способны вызывать сильное помутнение. При этом в состоянии пробирки на дне в большинстве случаев образуется осадок.
Под микроскопом стафилококки имеют вид правильных сферических кокков, которые имеют диаметр до 0,9 мкм. Стоит отметить, что они могут располагаться как одиночно, так и попарно, при этом иногда образуют
короткие цепочки. Однако основной формой для них является неправильное скопление, которое в большинстве случаев может напоминать гроздь винограда.
Что же касается патогенных штаммов, то они в свою очередь выглядят лиловыми, а непатогенные – синими. Штаммы культур стафилококка, выделенные из одной колонии, исследуются на патогенные признаки, а также чувствительно к антибиотикам. Для этого из посевов крови каждый день выделяют высевы на гемоагар. Понятие о патогенности этой культуры складывается из определенного перечня признаков изучаемого штамма:
* выработка экзотоксинов;
* гемолиз эритроцитов;
* выработка пигментов;
* коагуляция плазмы крови и так далее.
Способно лизироваться является косвенным показателем патогенных стафилококков, поскольку обычные штаммы, насколько известно не лизируются.
Наибольшего распространения получило серологическое исследование, которое подразумевает определение уровня стафилококкового антитоксина в динамике, то есть как в начале, так и в конце болезни. Стоит отметить, что в большинстве случаев при стафилококковом заболевании уровень антитоксина в крови постепенно нарастает в ходе болезни, что в свою роль является подтверждением этиологической роли стафилококка. Однако у ослабленных субъектов может отсутствовать нарастание антитоксина.